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產(chǎn)品名稱:細(xì)胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI

產(chǎn)品型號:CA1020-20

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):細(xì)胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI
是一種核酸染料,它不能穿透完整細(xì)胞膜,但對凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞的破損細(xì)胞膜能夠穿透,并使細(xì)胞核紅染

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CA1020-20細(xì)胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI的詳細(xì)資料:

細(xì)胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI 

貨號: CA1020
規(guī)格: 20T/50T/100T
保存:貯存于 2-8°C,復(fù)檢期為一年。建議 Annexin V-FITC 打開后,分裝成小份凍存于-20°C。
產(chǎn)品說明:細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一,在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面都起到十分重要
的作用。 Annexin V 是一種分子量為 35.8 KD 的 Ca2+
依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的
磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)高親和力特異結(jié)合。FITC-Annexin V 結(jié)合到凋亡細(xì)胞后,在藍(lán)色光的
激發(fā)下,發(fā)出綠色熒光,區(qū)分出凋亡細(xì)胞與正常細(xì)胞。碘化丙啶(Propidium  iodide,PI)是一種核酸染料,
它不能穿透完整細(xì)胞膜,但對凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞的破損細(xì)胞膜能夠穿透,并使細(xì)胞核紅染。將
FITC-Annexin V 與 PI 匹配使用,可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞區(qū)分開來。
細(xì)胞凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI操作步驟: 
 1.  調(diào)整待測細(xì)胞的濃度為 5×10五次方-1×10六次方個/ml。
 2.  取 1ml 細(xì)胞,1000rpm,4℃離心 10 分鐘,棄上清。
 3.  加入 1ml 預(yù)冷的 PBS,輕輕震蕩使細(xì)胞懸浮,1000rpm,4℃離心 10 分鐘,棄上清(對于貼壁細(xì)胞,先用胰酶消化,再用 PBS 洗滌)。
 4.  重復(fù)步驟 3 兩次。
 5.  將細(xì)胞重懸于 200µl Binding Buffer。
 6.  加入 10µl Annexin V-FITC 和 10µl PI,輕輕混勻,避光室溫反應(yīng) 15 分鐘  或 4℃反應(yīng) 30  分鐘。
 7.  加入 300µl Binding Buffer,在 1 小時內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測。
 8.  若用熒光顯微鏡檢測,將細(xì)胞混合液離心,取細(xì)胞沉淀涂片,再進(jìn)行觀察。
注意事項(xiàng):  : :  : 
為保證得到理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果在使用此試劑盒之前請認(rèn)真閱讀該注意事項(xiàng)。
 1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩管底,避免開蓋時液體灑落。
 2.Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物質(zhì),在保存與操作時請注意避光。
 3.Propidium iodide(PI)能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用。
 4.在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免 PBS 殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
 5.PI 染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議行 Annexin V-FITC 染色,上機(jī)前 5 分鐘再
加入 PI 染色。
產(chǎn)品內(nèi)容: :: :  CA1020-20  CA1020-50  CA1020-100
Annexin V-FITC  200µl  500µl  1000µl
Binding   Buffer  12ml  30ml  60ml
Propidium iodide(PI)  200µl  500µl  1000µl
 6.整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在 4℃下操作。
 7.反應(yīng)完畢后請盡快檢測,因?yàn)榧?xì)胞凋亡是一個動態(tài)的過程,反應(yīng) 1 小時后熒光強(qiáng)度就開始衰變。
 8.成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響,如細(xì)胞類型、細(xì)胞膜上 PS 的密度、發(fā)生凋亡時 PS 翻轉(zhuǎn)的比
例、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方法、所用試劑、誘導(dǎo)凋亡的時間等,把這些影響因素進(jìn)行優(yōu)化對實(shí)驗(yàn)成功是非常必要
的。
此試劑盒僅供科研使用。


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